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快速末端平齊化™ 和快速連接試劑盒
#E0542S 20 次反應(yīng) ?1,769
#E0542L 100 次反應(yīng) ?7,059
■ 5 分鐘快速連接粘性末端或平末端
■ 室溫下即可進(jìn)行連接反應(yīng)
■ T/A 克隆
■ dsDNA 切刻修復(fù)
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本試劑盒在室溫（25℃）反應(yīng) 5 分鐘，即可完成 DNA 粘性末端或平齊末端的連接反應(yīng)。
– 快速 T4 DNA 連接酶（重組酶）
– 2X 快速連接反應(yīng)緩沖液
132 mM Tris-HCl，20 mM MgCl2，2 mM DTT，2 mM ATP，15% 聚乙二醇（PEG 6000），pH 7.6 @
25℃。
該試劑盒經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制檢測(cè)，以確保酶的高純度和高效率。
用快速連接試劑盒能使大多數(shù)連接反應(yīng)在 25℃ 條件下 5 分鐘甚至更短時(shí)間內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，增加反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)效率不會(huì)增強(qiáng)。事實(shí)上，連接 1 小時(shí)后轉(zhuǎn)化效率便會(huì)降低，如果 25℃ 反應(yīng)過(guò)通宵，則轉(zhuǎn)化效率會(huì)下降到 75%。
電轉(zhuǎn)化可以使轉(zhuǎn)化效率提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。在用快速連接反應(yīng)產(chǎn)物做電轉(zhuǎn)化前，一定要降低 PEG 濃度。推薦使用柱離心式 DNA 純化方法，或選擇電轉(zhuǎn)連接酶（NEB #M0369）。
快速連接進(jìn)程曲線：LITMUS 28i 載體經(jīng) EcoRV 切割（平齊末端）或 HindⅢ切割（粘性末端）后，用小牛腸堿性磷酸酶（CIP）處理，膠回收純化。插入片段來(lái)自 φX174 DNA 的 HaeⅢ 消化產(chǎn)物（平齊末端）或 λDNA 的 HindⅢ 消化產(chǎn)物（粘性末端），插入片段和載體以 3:1 的比例，使用快速連接試劑盒進(jìn)行連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入化學(xué)方法制備的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，在 LB-amp 平板上 37℃ 過(guò)通宵培養(yǎng)。
| 連接酶 | |||
| NEB# | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 單價(jià) |
| M0202L | T4 DNA Ligase | 100,000 units | 3,029 |
| M0202M | T4 DNA Ligase, high conc. | 100,000 units | 3,029 |
| M0202S | T4 DNA Ligase | 20,000 units | 699 |
| M0202T | T4 DNA Ligase, high conc. | 20,000 units | 699 |
| M0202V | T4 DNA Ligase | 10,000 units | 349 |
| M2200L | Quick Ligation Kit | 150 rxns | 4,569 |
| M2200S | Quick Ligation Kit | 30 rxns | 1,009 |
| M2200V | Quick Ligation Kit | 15 rxns | 509 |
| M0367L | Blunt/TA Ligase Master Mix | 250 rxns | 4,569 |
| M0367S | Blunt/TA Ligase Master Mix | 50 rxns | 1,149 |
| M0370L | Instant Sticky-end Ligase Master Mix | 250 rxns | 4,569 |
| M0370S | Instant Sticky-end Ligase Master Mix | 50 rxns | 1,149 |
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